葡聚糖凝膠色譜柱的原理

凝膠層析又稱分子排阻層析或凝膠過濾，是以被分離物質的分子量差異為基礎的一種層析分離技術，這一技術為純化蛋白質等生物大分子提供了一種非常溫和的分離方法。層析的固定相載體是凝膠顆粒，目前應用較廣的是：具有各種孔徑范圍的葡聚糖凝膠（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）。

葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯劑3—氯1，2—環氧丙烷交聯而成的具有多孔網狀結構的高分子化合物。凝膠顆粒中網孔的大小可通過調節葡聚糖和交聯劑的比例來控制，交聯度越大，網孔結構越緊密；交聯度越小，網孔結構就越疏松，網孔的大小決定了被分離物質能夠自由出入凝膠內部的分子量范圍。這就使得能進入凝膠內部與不能進入凝膠內部的分子，如同按照分子大小過篩一樣，所以稱為分子篩。可分離的分子量范圍從幾百到幾十萬不等。

葡聚糖凝膠柱色譜的分離順序：操作時首先將凝膠在適宜的溶劑中浸泡，使其充分膨脹，然后再鋪成薄層，加入樣品后，再以同一溶劑洗脫，則樣品中大分子化合物不能進入凝膠顆粒內部，只在凝膠顆粒間移動，因此阻力小，行動快，走在前面;而小分子化合物能自由擴散進入到凝膠內部，因此在色譜時受到的阻力較大，行動慢，走在后面。如此經過一段時間的洗脫，混合物中各組分就會按照分子的大小而獲得分離。

基于葡聚糖凝膠色譜柱的原理，葡聚糖凝膠色譜柱Simpsil Sephadex G-10對阿莫西林等頭孢類抗生素的分析效果很好。

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